Determinação de parâmetros estruturais de α-tripsina em meios aquo-orgânicos

Resumo: O tripsinogênio e as isoformas de tripsina (alfa-, beta- e psi-tripsina) são serino proteases com uma cadeia polipeptídica contendo 229 e 223 resíduos de aminoácidos, respectivamente. São proteínas globulares com predominância de folhas beta antiparalelas e segmentos curtos em alfa-hélice em sua estrutura secundária e apresentando dois domínios com estruturas similares. O estudo da atividade e estabilidade destas enzimas tem sido de grande interesse durante anos de pesquisa devido à grande importância bioquímica e biotecnológica em que a enzima atua. No presente estudo investigou uma metodologia de otimização de purificação de isoformas de tripsina a fim obter proteínas mais puras, ativas e em maior quantidade do que os métodos usados anteriormente. As proteínas purificadas foram caracterizadas por sua massa molecular, atividade enzimática, tempos para decaimento de atividade de 5% e de 50% e outros parâmetros físico-químicos. A estabilidade termodinâmica de tripsinogênio alfa- e beta-tripsina em meio ácido foi investigada usando-se a técnica de calorimetria diferencial de varredura. A metodologia de purificação de isoformas de tripsina desenvolvida neste trabalho foi considerada satisfatória quanto à pureza, atividade e quantidades obtidas. Os resultados termodinâmicos para o tripsinogênio e para as isoformas de tripsina sugerem a ocorrência de uma mesma transição conformacional em dois estados é sofrida em todas as situações experimentais, possibilitando realizar a caracterização termodinâmica. Os resultados sugerem ainda que existe uma diminuição de estabilidade termodinâmica e estrutural à medida que a isoforma alfa-tripsina se converte em beta- e esta em psi-tripsina.

Data de início: 2015-10-01
Prazo (meses): 24

Participantes:

Papelordem decrescente Nome
Aluno Mestrado Dayanne Pinho Rosa
Coordenador Alexandre Martins Costa Santos
Pesquisador Evaldo Vitor Pereira
Pesquisador Maria Aparecida Cicilini
Vice-Coordenador Juliana Barbosa Coitinho Goncalves
Acesso à informação
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