PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE UMA PROTEASE DO MUCO DO PEIXE ESCORPIÃO Scorpaena
plumieri
Nome: MILENNA MACHADO PIROVANI
Data de publicação: 09/10/2024
Banca:
Nome |
Papel |
|---|---|
| HEBERTH DE PAULA | Examinador Interno |
| JULIANA BARBOSA COITINHO GONCALVES | Coorientador |
| SUELY GOMES DE FIGUEIREDO | Presidente |
| THIAGO NUNES DE MENEZES | Examinador Externo |
Resumo: Proteases são executores eficientes de uma reação química comum, a hidrólise de ligações peptídicas. Essas enzimas estão presentes em todos os domínios da vida, incluindo plantas, animais e microrganismos. Devido ao seu envolvimento em vários processos biológicos importantes (por exemplo, coagulação sanguínea, regulação da pressão arterial, processamento de proteínas e atividade antimicrobiana), bem como à sua alta especificidade, essas enzimas possuem potencial biotecnológico clínico e industrial. Recentemente, utilizando uma abordagem proteômica – modalidade 'shotgun' – nosso grupo de pesquisa identificou 228 proteínas no muco epidérmico do peixe-escorpião brasileiro, Scorpaena plumieri, entre elas, diversas classes de proteases. Neste estudo, uma protease gelatinolítica do muco da pele do S. plumieri (denominada Sp-MGP) foi purificada em forma homogênea por uma combinação de dois passos cromatográficos: filtração em gel convencional (coluna Sephacryl S-200) e troca aniônica (HPLC – coluna SynChropak AX300). O processo de purificação foi monitorado por zimografia (SDS-PAGE/gelatina). Estudos físico-químicos indicaram que a enzima purificada é uma glicoproteína monomérica de aproximadamente 79 kDa, conforme estimado por SDS-PAGE sob condições redutoras e não redutoras. A análise zimográfica da Sp-MGP mostrou zonas de atividade gelatinolítica no gel, com atividade ótima em pH 6,0 a 9,0, característico de serino-proteases. A enzima armazenada em soluções aquosas à temperatura ambiente (25 a 30°C), 4°C, -25°C e -80°C por 60 dias manteve sua atividade. Sp-MGP também apresenta atividade sobre os substratos sintéticos para trombina (S-2238) e calicreína (S-2266). A atividade em S-2238 foi inibida por aprotinina e benzamidina. Esses dados reafirmam a hipótese de que a enzima purificada é uma serino-protease, especificamente das subclasses semelhantes à trombina e à calicreína. As informações geradas representam o passo inicial no estudo de uma nova protease e podem contribuir para a exploração de seu potencial biotecnológico, além de fornecer conhecimento sobre a diversidade de moléculas no muco da pele de peixes.
