Determinação de parâmetros estruturais de α-tripsina em meios aquo-orgânicos

Resumo: O tripsinogênio e as isoformas de tripsina (alfa-, beta- e psi-tripsina) são serino proteases com uma cadeia polipeptídica contendo 229 e 223 resíduos de aminoácidos, respectivamente. São proteínas globulares com predominância de folhas beta antiparalelas e segmentos curtos em alfa-hélice em sua estrutura secundária e apresentando dois domínios com estruturas similares. O estudo da atividade e estabilidade destas enzimas tem sido de grande interesse durante anos de pesquisa devido à grande importância bioquímica e biotecnológica em que a enzima atua. No presente estudo investigou uma metodologia de otimização de purificação de isoformas de tripsina a fim obter proteínas mais puras, ativas e em maior quantidade do que os métodos usados anteriormente. As proteínas purificadas foram caracterizadas por sua massa molecular, atividade enzimática, tempos para decaimento de atividade de 5% e de 50% e outros parâmetros físico-químicos. A estabilidade termodinâmica de tripsinogênio alfa- e beta-tripsina em meio ácido foi investigada usando-se a técnica de calorimetria diferencial de varredura. A metodologia de purificação de isoformas de tripsina desenvolvida neste trabalho foi considerada satisfatória quanto à pureza, atividade e quantidades obtidas. Os resultados termodinâmicos para o tripsinogênio e para as isoformas de tripsina sugerem a ocorrência de uma mesma transição conformacional em dois estados é sofrida em todas as situações experimentais, possibilitando realizar a caracterização termodinâmica. Os resultados sugerem ainda que existe uma diminuição de estabilidade termodinâmica e estrutural à medida que a isoforma alfa-tripsina se converte em beta- e esta em psi-tripsina.

Data de início: 01/10/2015
Prazo (meses): 24

Participantes:

Papel	Nome
Aluno Mestrado	DAYANNE PINHO ROSA
Coordenador	ALEXANDRE MARTINS COSTA SANTOS
Pesquisador	EVALDO VITOR PEREIRA
Vice-Coordenador	JULIANA BARBOSA COITINHO GONCALVES